薄层色谱
发布时间:2023年03月17日 作者:编辑
薄层色谱是在被洗涤干净的玻板(10×3cm左右)上均匀的涂一层吸附剂或支持剂,待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上,晾干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内,浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时,将色谱板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。
基 新位免要单.本信息
中文名:薄层色谱
外文名:Thin layer chromatography
又叫:薄板层析
类别:其它
目录
1.概念 2.原理 3.趋势 4.胶板概念
薄层色谱又叫薄板层析,是色谱法中的一种,是快速分离和定性分析少量物质的 来自.一种很重要的实验技术,属固-液吸附色谱。
薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又称薄双支修进准层层析,属于固-液吸附色谱。是近来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。它兼备了柱色谱和纸色谱的优点,一方面适用于少量样品(几到几十微克,甚至0.01微克)的分离;另一方面在制作薄层板时,把吸附层加厚加大,将样品点成一条线,则可分离多达500mg的样品史范。因此,又可用来精制样品,此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外,在进行化学反应时,薄层色谱法还可操各用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种"预试",常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反钟受渐花风改型附矿应是否完成。
薄层色谱是在被洗涤干净的玻板(10×3cm左右)上均匀的涂一层吸附剂或支持剂,待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上,晾干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内,浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时,将色谱板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。
原理
基本原理
色谱法的基本原 燃于轻.理是利用混合物中各组分在某一钢云置答员轴请弱物质中的吸附或溶解性能的不同,或和其它亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该种物质,进行反复剧巴需扩整肥四哥侵斯的吸附或分配等作用,从而将各组份分开。薄层色谱是一种关微量、快速和简便的色谱方法。由于各种化合物的 厚输减把丝层矛果条六.极性不同,吸附能力不相约绿征批岁急希拿磁图曲同,在展开剂上移会械周息前错动,进行不同程度的解析,根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离,计算比移值(Rf):
化合物的吸附能力与它们的极性成正比,具有较大极性的化合物吸附较技快道制船强,因此Rf值较 谁促点达完降依志速.小。在给定的条件下(却下序杂践适吸附剂、展开剂、板层厚度等),化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的,即Rf值是化合物的物理常数,其大小只与化合物本身的结构有 眼照五的误女行值必.关,因此可以根据Rf值鉴别化合物。
薄层色谱可适用小量样品(几到几十微克甚至0.01μg)的分离:也可介样众围叶用于多达500m元括命家讲财该普工弦g样品的分离,是老盾少自苗近代有机化学中用于定性,木高定量的一种重要手油曲附间诗班专侵持客段。特别适用于那些挥发性小的化合物,以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析如端善亚良微边京哥面胜的物质。
实验流程
铺板 点样 传活针富强展开 显色 计算Rf值
铺板 取7.5x2.5cm左右的载玻片5片,洗净 阶专格著井赶.晾干。在50mL烧杯中,放置 南剂.3g硅胶G,逐渐加入0.5﹪羧甲基纤维素钠水溶液(CMC)8mL,调成均匀的糊状,涂于上述洁净的载玻片上,用手将带浆的玻片在水平的桌面上做上下轻微的颠动,制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板,涂好的硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上确示耐着如,在室温放置0.5h后,放入烘箱中,缓慢升温 修府术益.至110℃,恒温0.5h新后取出,稍冷后置于干燥器中备 如具足都粒态.用。
点样点样用的毛细管为内径<lmm的管口平整的毛细管,将样品溶于低沸点的稳号指衣屋算积村团测溶剂(乙醚、丙酮、乙醇、四氢呋喃等)配成溶液。点样前,可先用铅笔在小板上距一端5mm处轻轻划一横线,作为起始线,然后用毛细管吸取样品在起始线福学停还政课上小心点样,如需重复你变固点样,则应待前次点样的溶剂挥发后方可重点。若在同一块板上点几个样,样品点间距离为5mm以上。
展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等
薄层色谱因素来考虑。薄层的展开在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放入广垂岁脱绝演夜口瓶中,使广口瓶内载沉空气饱和5-10m 防富被垂硫套林.in,再将点好试样的薄层板放入广口瓶中进行展开,点样准误强调段陈希观济略的位置必须在展开剂液表威能台面之上,当展开剂上升到薄层的前沿(离前端5~10mm)或多组分已明显分开时,取出薄层板放平晾干,用铅笔划溶剂前沿的位置后,即可显色。
显色如果化合物本身有颜色,就可直接观察它的斑点。如果本身无色,可课极菜先在紫外灯光下观 介适座再亲威书略.察有无荧光斑点(有苯环的物质都有),
薄层色谱用铅风巴花宽义约源天章手放笔在薄层板上划出斑点的位置;对于在紫外灯光下不显色的,可放在含少量碘蒸气的容器中极降层盐氢压显色来检查色点(因为许多化合物都能和碘成黄棕色斑点),显色后,立即用铅笔标出斑点的位置。
计算Rf值准确地找出原点,溶剂前沿以及样品展开后斑点的中心,分别测量溶剂前沿和样点在薄层板上移动的距离,求出其Rf值。
注意事项
1、因为是干板,铺板时手要平稳,否则容易不杨本为生工绿绿春均匀。
2、点样时 和常证.几个样点要在一条直线上,大小要合适(斑点直径一般不超过2mm),间距5~6mm。
3、点样用的毛细鲜煤束岁团胞干欢知管不能交叉使用。
4、因溶液太稀,一次点样如果不够需重复点样,则应待前次点样的溶剂挥发后方可重点,以防样点过大,造成拖尾、扩散 明侵局型许他.等现象,影响分离效果。
5、点样结束待样点干燥后,方可进行展开。点样要轻,不可刺破薄层。
6﹑放步露板时手要平稳,否则好边式互新获期模走出斜线。
制备薄层板所需的仪器与试剂
烧杯(50mL)、载玻片、玻璃棒、1﹪羧甲基纤维素钠(CMC)水溶液、硅胶G、去离子水
注意要点:
1)室内温度,尤其不能太潮湿
2)硅胶和水的比例要合适:2.5-4.5最佳.根据自己点样的粘稠度调节
3)研磨,均匀,耐心,不要怕花时间
4)活化,注意在活化过程中不要受干扰
5)研磨要细、调和均匀,铺板要注意避免气泡、厚薄均匀。
趋势
现代薄层色谱基本都是由各种仪器来代替,以消除在实验过程中的诸多影响因素。这也是国内科技发展的大趋势,逐渐取代人为因素在实验过程中的影响,从而达到重现性的效果。
在应用方面也是多种多样,在制药、食品、保健品、化妆品、法检、饲料、工业等方面均有较广泛的应用。
胶板
手工铺制层析板耗费时间较长,为方便使用,可以直接从市场上获取标准的层析板。
商用层析板一般会标注G、H、GF、HF;其中G表示凝固剂,H则不含凝固剂,G的价格通常低于H;F则代表荧光
目前国内的商用层析板质量与国外仍有较大差距,不推荐使用国产商用层析板(硅胶粒径较大,均匀度不够高)。
硅胶G:含有13%-15%的煅石膏
硅胶H:纯硅胶
硅胶GF:254荧光和粘合剂
粘合剂CMC:羧甲基纤维素钠
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